不过，首轮问询回复中还存在五方面问题，如回复避重就轻、答非所问，没有针对性回应所提问题的关键点，有的甚至遗漏问题。
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还有的回复刻意避短、夸大其词，回复内容的依据和理由不充分，客观性和准确性存在疑问。有的回复不合要求，没有将补充到招股说明书的内容凸显出来，少数保荐人擅自修改已经披露的招股说明书中的重要财务数据，个别保荐人甚至违反执业准则，修改上交所问询的问题。安信证券在研报中指出，科创板首轮问询的企业，从问题个数上看，关于发行人的核心业务、业务方面的篇幅占20%-30%，成为被询问的重点。
在首轮问询回复后，第二轮问询及其回复随即展开。目前，上交所共计发出第二轮问询企业数量有29家，5月14日晚间深圳微芯生物科技股份有限公司已经回复上交所二轮问询。在第二轮问询中，深圳微芯生物科技股份有限公司核心技术平台、生产资质等14个问题被重点关注。
上交所表示，公开化的问询式审核，是科创板发行上市审核的重要机制，目的是为了“问出一家真公司”。据了解，在首轮问询和回复的基础上，第二轮问询将更加突出重大性、更加聚焦关键问题、更加注重揭示风险。上交所进一步指出，第二轮问询的提问方法与首轮问询也有所区别，更加精简扼要，更具整合性，已披露的第二轮问询，问题数量14个，较首轮问询显著减少。
从内容上看，二轮问询的问题主要针对首轮问询回复就发行人科创属性和技术先进性、发行人是否符合发行条件和上市条件、信息披露中法律合规性及财务真实性、科创企业成长发展中特有的风险等重大事项，是否说明白了、讲清楚了，相关信息披露是否达到应有的充分、一致、可理解要求。
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按照《科创板股票发行上市审核规则》，审核问询可多轮次进行。第二轮问询回复后，上交所认为仍需继续问询的，将在规定时限内进行多轮问询；不需要继续问询的，将按照规则和程序进入召开审核会议形成初步审核意见、上市委审议、证监会注册等后续环节。
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